α-sarcoglycan Double Nickase Plasmid (m): sc-422904-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das α-sarcoglycan Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- α-sarcoglycan Double-Nickase-Plasmid (m) und α-sarcoglycan Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Sgca abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: α-sarcoglycan: sc-271321
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
α-sarcoglycan Double Nickase Plasmid (m) | sc-422904-NIC | 20 µg | $410.00 |
Sgca kodiert α-Sarkoglykan, eine zentrale Komponente des Sarkoglykan-Subkomplexes innerhalb des Dystrophin‑Glykoprotein‑Komplexes, der die Membran der Muskelfaser stabilisiert und das Zytoskelett mit der extrazellulären Matrix verbindet. In Skelett- und Herzmuskel unterstützt α‑Sarkoglykan die Integrität des Sarkolemms während der Kontraktion und trägt zu Mechanotransduktionswegen bei, die die Calciumhomöostase, die Membranreparatur und die Organisation des Zytoskeletts beeinflussen. Eine Störung der sarkoglykanabhängigen Architektur begünstigt Membranfragilität, Degeneration von Muskelfasern und chronische Umbauprozesse, wodurch Sgca ein häufig genutzter Genlokus zur Modellierung von Funktionsstörungen des Dystrophin‑Glykoprotein‑Komplexes ist. Eine Beeinflussung von Sgca in der Maus ist daher relevant, um Muskelhomöostase, Stressantworten und Signalwege zu untersuchen, die mit muskeldystrophieähnlichen Phänotypen verbunden sind.
α-sarcoglycan Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Sgca-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Sgca abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Sgca-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Sgca-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.