Plasmide CRISPR/Cas9 KO α-sarcoglycan (m): sc-422904

Présentation

Sgca code l’α-sarcoglycane, un composant transmembranaire central du complexe des sarcoglycanes au sein du complexe dystrophine–glycoprotéines, qui stabilise le sarcolemme et soutient la transmission de la force dans le muscle squelettique et le muscle cardiaque. En reliant la matrice extracellulaire au cytosquelette, l’α-sarcoglycane contribue à l’intégrité membranaire et à la mécanotransduction lors de la contraction, et protège les myofibres des dommages induits par la contraction. La perturbation de Sgca altère l’assemblage du complexe de protéines associées à la dystrophine et compromet la stabilité des fibres musculaires, fournissant une base moléculaire à des phénotypes de type dystrophie musculaire dans des systèmes modèles. Sgca chez la souris constitue donc une cible clé pour étudier la signalisation d’adhésion au niveau du sarcolemme, les programmes de dégénérescence/régénération musculaires, ainsi que les voies en aval de remodelage inflammatoire et fibrotique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO α-sarcoglycan (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sgca dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sgca, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sgca à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine α-sarcoglycan.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sgca pour l'étude de la signalisation de α-sarcoglycan, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sgca essentiels à la fonction de α-sarcoglycan
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sgca pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le α-sarcoglycan plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le α-sarcoglycan plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sgca. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le α-sarcoglycan plasmide HDR (m) et le α-sarcoglycan (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sgca pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sgca définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.