α-internexin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402920

Descripción general

INA codifica la α-internexina, una proteína de filamento intermedio neuronal que contribuye a la arquitectura del citoesqueleto y al calibre axonal al ensamblarse en redes de filamentos junto con otras subunidades de neurofilamentos. Favorece el crecimiento de las neuritas, la estabilidad del axón y el transporte intracelular al organizar el sistema de filamentos intermedios en neuronas en desarrollo y maduras. La desregulación de la dinámica de los filamentos intermedios, incluidos cambios en la expresión de INA o en la organización de los filamentos, se analiza con frecuencia en el contexto de la vulnerabilidad neuronal, la axonopatía y procesos neurodegenerativos asociados a la agregación de proteínas. Como proteína estructural enriquecida en neuronas, la α-internexina se utiliza ampliamente como marcador y como punto de entrada mecanístico para estudios de diferenciación neuronal y remodelación del citoesqueleto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO α-internexin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen INA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del INA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de INA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína α-internexin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en INA para la investigación de la señalización de α-internexin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de INA críticos para la función de α-internexin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de INA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido α-internexin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido α-internexin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus INA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR α-internexin (h) y el plásmido HDR α-internexin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología INA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana INA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.