Plasmide Double Nickase (h) α-FR: sc-400909-NIC

FOLR1 code le récepteur alpha du folate (α‑FR), une protéine de surface cellulaire ancrée par glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui se lie aux folates avec une forte affinité et soutient le métabolisme cellulaire à un carbone en facilitant leur captation. En régulant la disponibilité intracellulaire en folates, α‑FR influence la biosynthèse des nucléotides, les réactions de méthylation et l’homéostasie rédox, ce qui l’associe à la prolifération et à l’état métabolique dans les tissus épithéliaux. L’expression de FOLR1 est fréquemment altérée dans les cancers présentant des caractéristiques de lignée épithéliale et elle est également impliquée dans des processus développementaux et neurobiologiques dépendants des folates. En tant que récepteur membranaire soumis à un trafic endocytique, α‑FR constitue un point d’entrée pertinent pour étudier le transport des nutriments, le recyclage des récepteurs et l’adaptation métabolique dans des modèles cellulaires humains.

α-FR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FOLR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FOLR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FOLR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FOLR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.