Plasmide Double Nickase (h) α-defensin 5: sc-404991-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) α-defensin 5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide α-defensin 5 Double Nickase (h) et le plasmide α-defensin 5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DEFA5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: α-defensin 5 Antibody (8c8): sc-53997
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) α-defensin 5 | sc-404991-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) α-defensin 5 | sc-404991-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DEFA5 code l’α-défensine 5 humaine, un peptide antimicrobien cationique produit principalement par les cellules de Paneth dans l’intestin grêle et libéré dans la lumière intestinale dans le cadre de l’immunité muqueuse innée. Après maturation protéolytique, l’α-défensine 5 perturbe les membranes microbiennes et contribue à façonner la composition du microbiote intestinal, tout en soutenant la fonction de barrière épithéliale et les programmes de défense de l’hôte. Son expression est liée à la différenciation des cellules de Paneth et à la biologie des granules de sécrétion, et elle s’articule avec des voies de signalisation inflammatoire et de détection microbienne qui régulent l’homéostasie intestinale. Des niveaux altérés de DEFA5 et un dysfonctionnement des cellules de Paneth ont été associés aux maladies inflammatoires de l’intestin et à une susceptibilité accrue aux infections entériques, ce qui en fait un marqueur utile et un nœud fonctionnel important en recherche sur l’immunologie des muqueuses.
α-defensin 5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DEFA5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DEFA5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DEFA5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DEFA5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.