Plasmide CRISPR/Cas9 KO α-actinin-3 (m): sc-418972
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- α-actinin-3 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique α-actinin-3, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: α-actinin Antibody (H-2): sc-17829
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO α-actinin-3 (m) | sc-418972 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Actn3 code l’α‑actinine‑3, une protéine sarcomérique de liaison à l’actine enrichie au niveau du disque Z des fibres musculaires squelettiques à contraction rapide, où elle réticule et stabilise les filaments fins pendant la contraction. En organisant l’appareil contractile et en contribuant à la mécanique du sarcomère, l’α‑actinine‑3 influence des traits de performance musculaire et des propriétés de type de fibres associés au métabolisme glycolytique et à la réponse aux charges mécaniques. La perte de fonction de l’α‑actinine‑3 est associée à des phénotypes modifiés de force et d’endurance musculaires et a été étudiée dans le contexte des myopathies, de l’atrophie musculaire et de l’adaptation à l’exercice ou au désentraînement. Dans des modèles murins, Actn3 constitue un système pratique pour étudier les réseaux myofibrillaires structuraux et les voies qui régulent la contractilité, le remodelage musculaire et les réponses au stress.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO α-actinin-3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Actn3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Actn3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Actn3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine α-actinin-3.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Actn3 pour l'étude de la signalisation de α-actinin-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Actn3 essentiels à la fonction de α-actinin-3
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Actn3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le α-actinin-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le α-actinin-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Actn3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le α-actinin-3 plasmide HDR (m) et le α-actinin-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Actn3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Actn3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.