α-actinin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m2): sc-430958-KO-2

概要

Actn1は、Ca2+非感受性のアクチン結合タンパク質であるα-アクチニン-1をコードし、線維状アクチン（F-アクチン）を架橋して、皮質アクチンネットワーク、ストレスファイバー、および接着に関連する細胞骨格構造の組織化に関与します。マウス細胞では、α-アクチニン-1は、RhoファミリーGTPaseなどのシグナル伝達ハブと協調してアクチン再構築を調整することで、インテグリンに連結したフォーカルアドヒージョンのダイナミクス、メカノトランスダクション、および細胞移動を支持します。細胞骨格張力と膜安定性の維持における役割を通じて、ACTN1は血小板産生と止血機能の研究にも関連し、アクチン構築の変化はプロプレートレット形成や細胞骨格の耐性を乱す可能性があります。α-アクチニン-1機能の異常は、遺伝性の血小板疾患や、接着および組織構築に関わるより広範な表現型と関連づけられており、Actn1は細胞骨格駆動性の疾患機序をモデル化するための有用な標的となります。

α-actinin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）は、mouse細胞株におけるActn1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Actn1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Actn1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、α-actinin-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、α-actinin-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Actn1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• α-actinin-1の機能に不可欠なActn1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Actn1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• α-actinin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびα-actinin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Actn1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  α-actinin-1 HDRプラスミド（m）および α-actinin-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはActn1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のActn1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。