Plasmide CRISPR/Cas9 KO α-actinin-1 (m2): sc-430958-KO-2

Présentation

Actn1 code pour l’α‑actinine‑1, une protéine de liaison à l’actine insensible au Ca2+ qui réticule l’actine filamenteuse et organise les réseaux d’actine corticaux, les fibres de stress et les structures du cytosquelette associées à l’adhésion. Dans les cellules de souris, l’α‑actinine‑1 soutient la dynamique des adhésions focales liées aux intégrines, la mécanotransduction et la migration cellulaire en coordonnant le remodelage de l’actine avec des plateformes de signalisation telles que les GTPases de la famille Rho. Par son rôle dans le maintien de la tension cytosquelettique et de la stabilité membranaire, ACTN1 est pertinent pour les études sur la biogenèse plaquettaire et la fonction hémostatique, où une architecture de l’actine altérée peut perturber la formation des proplaquettes et la résilience du cytosquelette. Un dysfonctionnement de l’α‑actinine‑1 a été associé à des troubles plaquettaires héréditaires et à des phénotypes plus larges impliquant l’adhésion et l’architecture tissulaire, ce qui fait d’Actn1 une cible utile pour modéliser des mécanismes pathogènes dépendants du cytosquelette.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO α-actinin-1 (m2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Actn1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Actn1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Actn1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine α-actinin-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Actn1 pour l'étude de la signalisation de α-actinin-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Actn1 essentiels à la fonction de α-actinin-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Actn1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le α-actinin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le α-actinin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Actn1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le α-actinin-1 plasmide HDR (m) et le α-actinin-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Actn1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Actn1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.