Plasmide CRISPR d'Activation (h) α3e Tubulin: sc-400023-ACT

TUBA3E code l’α3e-tubuline, une sous-unité se liant à la β-tubuline qui polymérise en microtubules afin de soutenir l’architecture du cytosquelette, le transport intracellulaire, ainsi que la formation et la fonction du fuseau mitotique. En tant que composant central du réseau de microtubules, l’α3e-tubuline contribue à des processus tels que la progression du cycle cellulaire, le positionnement des organites et la croissance des neurites, via l’assemblage dynamique et le remodelage des microtubules. Les isotypes de tubuline peuvent moduler la stabilité des microtubules et leurs interactions avec les protéines associées aux microtubules et les complexes moteurs, influençant des voies qui régissent la prolifération et la polarité cellulaire. Une dynamique des microtubules dérégulée et des profils d’expression de la tubuline altérés sont fréquemment associés à l’instabilité chromosomique et aux divisions cellulaires aberrantes observées dans de nombreux contextes pathologiques, ce qui soutient les études mécanistiques de la régulation du cytosquelette.

α3e Tubulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TUBA3E sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

α3e Tubulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TUBA3E dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TUBA3E, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de α3e Tubulin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TUBA3E natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de α3e Tubulin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie α3e Tubulin dans les cellules tumorales présentant une expression de TUBA3E silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.