ZRSR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423570

Übersicht

Zrsr1 kodiert ZRSR1, einen mit dem Spleißosom assoziierten Faktor, der an der Erkennung und Verarbeitung von U12-Typ-Introns während des prä-mRNA-Spleißens beteiligt ist. Durch die Beeinflussung der Aktivität des Minor-Spleißosoms kann ZRSR1 die Transkript-Reifung, das Isoformen-Gleichgewicht und nachgeschaltete Genexpressionsprogramme verändern, die mit Zellzykluskontrolle und Differenzierung verknüpft sind. In der Maus ist Zrsr1 zudem im Kontext genomischer Prägung (Imprinting) und elternspezifischer Effekte bemerkenswert und bietet damit einen Rahmen, um allel-spezifische Regulation der RNA-Prozessierung zu untersuchen. Eine Fehlregulation des Minor-Intron-Spleißens wurde in mehreren Modellsystemen mit Entwicklungsstörungen und hämatopoetischer Dysfunktion in Verbindung gebracht, wodurch Zrsr1 für mechanistische Studien zur Spleiß-assoziierten Krankheitsbiologie relevant ist.

Das ZRSR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Zrsr1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Zrsr1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Zrsr1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZRSR1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Zrsr1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZRSR1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Zrsr1-Exone abzielen, die für die ZRSR1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Zrsr1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZRSR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ZRSR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Zrsr1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZRSR1 HDR-Plasmid (m) und ZRSR1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Zrsr1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Zrsr1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.