Plásmido CRISPR de Activación (h) ZP1: sc-403636-ACT

ZP1 (glucoproteína 1 de la zona pelúcida) codifica una proteína de la matriz extracelular que es un componente estructural central de la zona pelúcida humana, donde favorece el ensamblaje y la estabilización de la red de glucoproteínas que rodea al ovocito. Esta matriz participa en procesos reproductivos clave, como la maduración del ovocito, la unión del espermatozoide y la prevención de la polispermia, lo que refleja una regulación coordinada del tráfico secretor, la organización de la matriz extracelular y los eventos de señalización asociados a la fecundación. La alteración de la función de ZP1 se relaciona con un deterioro de la integridad de la zona pelúcida y se ha asociado con fenotipos de infertilidad femenina, como el desarrollo anómalo del ovocito y el fallo de fecundación. Como gen restringido por linaje y estadio, ZP1 se utiliza con frecuencia como marcador para estudiar programas transcripcionales específicos del ovocito y la biología de la matriz extracelular en modelos de investigación reproductiva.

ZP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZP1 en células tumorales con expresión de ZP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.