Plásmido CRISPR de Activación (h) ZnT-10: sc-403451-ACT

SLC30A10 codifica el transportador humano de zinc ZnT-10, un miembro de la familia SLC30 que media la homeostasis celular de manganeso y zinc al regular el eflujo y la compartimentalización de metales divalentes. Al controlar la distribución intracelular de metales, ZnT-10 influye en las respuestas al estrés oxidativo, la función mitocondrial y la actividad de enzimas dependientes de metales, vinculando el transporte de oligoelementos con vías metabólicas y redox más amplias. La desregulación de la función de SLC30A10 se asocia con un manejo alterado del manganeso y con fenotipos neurohepáticos posteriores, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudiar la toxicidad de metales, la vulnerabilidad neuronal y la fisiología hepática. Como transportador de membrana, ZnT-10 también proporciona una lectura accesible para investigar el tráfico del transportador, su localización subcelular y la regulación génica sensible a metales.

ZnT-10 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC30A10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZnT-10 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC30A10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC30A10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZnT-10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC30A10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZnT-10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZnT-10 en células tumorales con expresión de SLC30A10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.