ZnT-1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-403094-LAC

Das humane SLC30A1-Gen kodiert ZnT-1, einen Zinkexporter der Plasmamembran, der Zellen vor Zinküberladung schützt, indem er das zytosolische Zn2+ senkt und metallabhängige Signalwege mitprägt. Indem ZnT-1 den Zinkexport an die zelluläre Homöostase koppelt, beeinflusst es Reaktionen auf oxidativen Stress, die Anfälligkeit für Apoptose sowie die durch Metallothioneine regulierte Pufferkapazität – mit nachgelagerten Effekten auf Transkriptionsprogramme, die von zinkbindenden Proteinen abhängen. Veränderte Zinkhandhabung und eine Dysregulation von SLC30A1 wurden mit neurobiologischen und erregbarkeitsbezogenen Prozessen in Verbindung gebracht, ebenso wie mit breiteren Kontexten, in denen ein Metallungleichgewicht zu Zellschädigung und Entzündung beiträgt. Damit ist ZnT-1 ein hilfreicher Ansatzpunkt, um die zinkabhängige Regulation der Membranphysiologie und von Stressanpassungswegen in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

ZnT-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SLC30A1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ZnT-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SLC30A1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ZnT-1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SLC30A1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.