ZnT-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403094-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ZnT-1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ZnT-1 Double Nickase Plasmid (h) e il ZnT-1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SLC30A1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ZnT-1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403094-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZnT-1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403094-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC30A1 codifica il trasportatore umano di zinco ZnT-1, un carrier di efflusso della membrana plasmatica che limita l’accumulo di Zn2+ nel citosol e contribuisce a mantenere l’omeostasi degli ioni metallici. Collegando l’esportazione dello zinco alle risposte cellulari allo stress, ZnT-1 influenza l’equilibrio redox, i programmi trascrizionali sensibili ai metalli e la protezione dalla citotossicità indotta dallo zinco. Un’alterata attività di SLC30A1 è stata associata a una segnalazione dello zinco compromessa, con possibili effetti sull’eccitabilità neuronale, sulla funzione di barriera epiteliale e sull’attivazione delle cellule immunitarie. La disregolazione delle vie di trasporto dello zinco è correlata a neurodegenerazione, disfunzione metabolica e fenotipi infiammatori, rendendo SLC30A1 un nodo utile per studi meccanicistici della biologia dipendente dai metalli.
ZnT-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC30A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC30A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC30A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC30A1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.