Plásmido CRISPR de Activación (h) ZNF831: sc-414334-ACT

ZNF831 (proteína de dedo de zinc 831) es un factor de transcripción humano de tipo C2H2 con dedos de zinc, implicado en la regulación de programas de expresión génica que determinan la función y la diferenciación de las células inmunitarias. Participa en el control transcripcional y en procesos asociados a la cromatina que influyen en la señalización de citocinas y la activación de linfocitos, integrándose en vías más amplias que gobiernan las respuestas inmunitarias adaptativas. Estudios genéticos han vinculado variaciones cerca de ZNF831 con rasgos mediados por el sistema inmunitario y con la susceptibilidad a enfermedades autoinmunes, lo que respalda su relevancia para investigar redes reguladoras subyacentes a fenotipos inflamatorios. Como proteína nuclear de unión al ADN, ZNF831 constituye una herramienta útil para explorar los circuitos de transcripción y la arquitectura reguladora de genes en sistemas modelo hematopoyéticos e inmunitarios.

ZNF831 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZNF831 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZNF831 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZNF831 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZNF831, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZNF831. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZNF831 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZNF831 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZNF831 en células tumorales con expresión de ZNF831 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.