ZNF831 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-414334-ACT

ZNF831 (Zinkfingerprotein 831) ist ein humaner C2H2-Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der an der Regulation von Genexpressionsprogrammen beteiligt ist, die Funktion und Differenzierung von Immunzellen prägen. Er wirkt an der transkriptionellen Kontrolle und an chromatinassoziierten Prozessen mit, die die Zytokinsignalisierung und die Aktivierung von Lymphozyten beeinflussen, und fügt sich in übergeordnete Signalwege ein, die adaptive Immunantworten steuern. Genetische Studien haben Varianten in der Nähe von ZNF831 mit immunvermittelten Merkmalen und einer erhöhten Anfälligkeit für Autoimmunerkrankungen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für die Untersuchung regulatorischer Netzwerke unterstreicht, die entzündlichen Phänotypen zugrunde liegen. Als nukleäres DNA-bindendes Protein bietet ZNF831 einen nützlichen Ansatzpunkt, um transkriptionelle Schaltkreise und die genregulatorische Architektur in hämatopoetischen und immunologischen Modellsystemen zu untersuchen.

ZNF831 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZNF831-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZNF831 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZNF831-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZNF831-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZNF831-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZNF831-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZNF831-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZNF831-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZNF831-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.