Partículas Lentivirales de Activación (h) ZNF71: sc-410081-LAC

ZNF71 codifica una proteína con dedos de zinc de dominio KRAB que funciona como regulador transcripcional específico de secuencia, por lo general actuando en conjunto con la maquinaria de remodelación de cromatina asociada a KAP1/TRIM28 para configurar heterocromatina represiva y ajustar finamente los programas de expresión génica. Como parte de la red más amplia de dedos de zinc C2H2, ZNF71 se vincula con el control de los estados de diferenciación celular, el silenciamiento epigenético de elementos repetitivos y el mantenimiento de la homeostasis transcripcional. La desregulación de los factores KRAB-ZNF se estudia con frecuencia en el contexto de los paisajes transcripcionales alterados que se observan en el cáncer y en otros trastornos con inestabilidad epigenética, lo que convierte a ZNF71 en un nodo relevante para investigar los circuitos de factores de transcripción. La investigación sobre ZNF71 suele intersectar con vías que regulan la accesibilidad de la cromatina, la regulación de promotores y potenciadores (enhancers), y la represión o activación génica dependiente del contexto.

Las partículas de activación lentiviral ZNF71 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ZNF71 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ZNF71 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ZNF71, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ZNF71. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ZNF71 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.