ZNF35 Double Nickase Plasmid (h): sc-411079-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ZNF35 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ZNF35 Double-Nickase-Plasmid (h) und ZNF35 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ZNF35 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ZNF35: sc-376972
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ZNF35 Double Nickase Plasmid (h) | sc-411079-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZNF35 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-411079-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ZNF35 kodiert ein KRAB-Domänen-C2H2-Zinkfingerprotein, das an sequenzspezifischer DNA-Bindung und transkriptioneller Repression beteiligt ist, indem es Korepressor-Komplexe wie KAP1/TRIM28 rekrutiert und so die Bildung von Heterochromatin sowie epigenetische Stilllegung fördert. Als Teil umfassender, durch Zinkfinger vermittelter Genregulationsnetzwerke ist ZNF35 dafür prädestiniert, die Chromatinorganisation, die Kontrolle der Transkription durch RNA-Polymerase II und Programme zur Aufrechterhaltung des Zellzustands zu beeinflussen. Eine veränderte Expression oder regulatorische Variation von KRAB-ZNF-Faktoren wurde mit fehlregulierten Transkriptionsprogrammen in Krebs und anderen Erkrankungen in Verbindung gebracht, wodurch ZNF35 einen nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung transkriptioneller Schaltkreise und epigenetischer Kontrolle in menschlichen Zellen darstellt. Die funktionelle Untersuchung von ZNF35 kann dazu beitragen zu klären, wie KRAB-ZNF-Proteine zur linien-/zelltypspezifischen Genrepression und zur Stabilität von Genexpressionsmustern beitragen.
ZNF35 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ZNF35-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ZNF35 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ZNF35-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ZNF35-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.