Plásmido Doble Nickase (h) ZNF136: sc-411093-NIC

ZNF136 codifica una proteína de dedos de zinc C2H2 que contiene un dominio KRAB, implicada en la unión al ADN de manera específica de secuencia y en la represión transcripcional mediante el reclutamiento de complejos correpresores. Como parte de redes reguladoras basadas en dedos de zinc, se espera que ZNF136 influya en el estado de la cromatina y en programas de expresión génica que coordinan la diferenciación celular, la proliferación y la transcripción sensible al estrés. La desregulación del silenciamiento mediado por KRAB-ZNF se ha asociado con alteraciones del control epigenético y con ruido transcripcional en diversos contextos de enfermedad, lo que hace que ZNF136 sea de interés para estudios sobre la estabilidad de la regulación génica. La evaluación funcional de ZNF136 respalda trabajos mecanísticos sobre el control de la transcripción, vías asociadas a la cromatina y efectos posteriores sobre fenotipos celulares relevantes para la investigación biomédica.

ZNF136 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ZNF136 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ZNF136. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ZNF136. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ZNF136 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.