Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZHX2 (m): sc-436490

Présentation

Zhx2 code la protéine « zinc fingers and homeoboxes 2 » (ZHX2), un facteur de transcription nucléaire capable d’agir comme un régulateur de l’expression génique dépendant du contexte, via sa liaison à l’ADN et ses interactions avec d’autres répresseurs transcriptionnels. Dans les tissus murins, ZHX2 a été impliquée dans les programmes de différenciation et de maturation des hépatocytes ainsi que dans le contrôle de réseaux de gènes métaboliques enrichis dans le foie, notamment des voies liées au métabolisme des lipides et au traitement des xénobiotiques. Une activité altérée de ZHX2 a été associée à des programmes transcriptionnels dérégulés pertinents pour l’inflammation et la biologie tumorale, ce qui en fait un nœud d’intérêt pour étudier le contrôle transcriptionnel de l’homéostasie tissulaire. Ces propriétés soutiennent l’exploration de mécanismes chromatiniens et transcriptionnels dépendants de ZHX2 dans des états cellulaires pertinents pour le développement et les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZHX2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Zhx2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Zhx2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Zhx2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZHX2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Zhx2 pour l'étude de la signalisation de ZHX2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Zhx2 essentiels à la fonction de ZHX2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Zhx2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZHX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ZHX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Zhx2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZHX2 plasmide HDR (m) et le ZHX2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Zhx2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Zhx2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.