ZFP64 Double Nickase Plasmid (h): sc-410027-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ZFP64 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ZFP64 Double-Nickase-Plasmid (h) und ZFP64 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ZFP64 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ZFP64: sc-374263
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ZFP64 Double Nickase Plasmid (h) | sc-410027-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZFP64 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-410027-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ZFP64 (Zinkfingerprotein 64) ist ein mutmaßlicher C2H2-Zinkfinger-Transkriptionsfaktor mit KRAB-Domäne, der an sequenzspezifischer DNA-Bindung und epigenetischer Regulation der Genexpression beteiligt sein soll. Durch die Rekrutierung von Korepressor-Komplexen und chromatinmodifizierenden Enzymen wird angenommen, dass ZFP64 die Transkriptionsstilllegung, die Aufrechterhaltung von Chromatinzuständen und Programme der Zellidentität beeinflusst. Eine veränderte Regulation von KRAB-Zinkfinger-Netzwerken wurde mit dysregulierter Differenzierung, Genomstabilität und onkogenen Transkriptionszuständen in Verbindung gebracht, wodurch ZFP64 für Studien zur krebsassoziierten Genregulation und zur Entwicklungssteuerung relevant ist. In menschlichen Zellen unterstützt die Untersuchung der ZFP64-Funktion eine mechanistische Analyse transkriptioneller Schaltkreise und chromatinabhängiger Signalwege.
ZFP64 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ZFP64-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ZFP64 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ZFP64-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ZFP64-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.