ZFP57 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404270-ACT

Human ZFP57 kodiert ein KRAB-Zinkfingerprotein, das an methylierte DNA in Imprinting-Kontrollregionen bindet und KAP1/TRIM28 sowie assoziierte Chromatinmodifikatoren rekrutiert, um während der frühen Entwicklung die DNA-Methylierung und repressive Histonmarkierungen aufrechtzuerhalten. Über diese epigenetische Erhaltungsfunktion unterstützt ZFP57 das genomische Imprinting, allelspezifische Genregulation und eine stabile transkriptionelle Stilllegung an ausgewählten Loci. Eine Störung ZFP57-gekoppelter Imprinting-Programme ist mit abnormen Methylierungsmustern und entwicklungsbezogener Fehlregulation verbunden, was ZFP57 für Studien zu Imprinting-Erkrankungen und zur Stabilität des Epigenoms relevant macht. ZFP57 wird daher häufig als Modellfaktor eingesetzt, um die Aufrechterhaltung der DNA-Methylierung, KRAB-vermittelte Repression und Chromatin-Remodeling-Signalwege zu untersuchen.

ZFP57 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZFP57-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZFP57 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZFP57-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZFP57-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZFP57-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZFP57-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZFP57-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZFP57-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZFP57-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.