Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZFP101 (m): sc-423758

Présentation

Zfp101 chez la souris code la protéine ZFP101, un facteur à doigts de zinc de type C2H2 prédit, impliqué dans la liaison à l’ADN dépendante de la séquence et la régulation transcriptionnelle. En tant que facteur nucléaire putatif, ZFP101 pourrait contribuer au contrôle de programmes d’expression génique associés à la chromatine, qui coordonnent des transitions d’état cellulaire telles que la prolifération, la différenciation et la transcription en réponse au stress. La perturbation des réseaux de régulation médiés par les doigts de zinc est largement pertinente pour comprendre les mécanismes à l’origine de phénotypes du développement et de la dérégulation transcriptionnelle observée dans des maladies complexes, notamment le cancer et les troubles du neurodéveloppement. Zfp101 constitue donc un locus utile pour étudier comment des répresseurs/activateurs transcriptionnels façonnent la signalisation en aval et les profils d’expression à l’échelle du génome dans des systèmes modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZFP101 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Zfp101 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Zfp101, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Zfp101 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZFP101.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Zfp101 pour l'étude de la signalisation de ZFP101, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Zfp101 essentiels à la fonction de ZFP101
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Zfp101 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZFP101 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ZFP101 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Zfp101. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZFP101 plasmide HDR (m) et le ZFP101 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Zfp101 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Zfp101 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.