Plásmido CRISPR de Activación (h) ZFP100: sc-411821-ACT

El gen humano ZNF473 codifica la proteína de dedos de zinc ZFP100, un presunto regulador transcripcional con capacidad de unión al ADN, caracterizado por dominios de dedos de zinc tipo C2H2 que se asocian comúnmente con el control específico de la secuencia en la expresión génica. Al modular la actividad de promotores y potenciadores (enhancers), se espera que ZFP100 influya en programas transcripcionales dependientes de la cromatina que determinan la identidad celular, las respuestas al estrés y las vías relacionadas con la diferenciación. La regulación alterada de los factores de transcripción con dedos de zinc se asocia con frecuencia a estados epigenéticos desregulados y redes de señalización aberrantes, lo que convierte a ZNF473 en un locus útil para investigar mecanismos de control transcripcional en contextos relevantes para la enfermedad. Caracterizar las redes génicas dependientes de ZFP100 puede respaldar estudios sobre la remodelación de vías, la función de elementos reguladores y los cambios transcriptómicos en células humanas.

ZFP100 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZNF473 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZFP100 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZNF473 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZNF473, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZFP100. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZNF473 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZFP100 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZFP100 en células tumorales con expresión de ZNF473 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.