Particules Lentivirales d'Activation (m) ZFHX4: sc-429838-LAC

Zfhx4 code ZFHX4, un grand facteur de transcription homeobox à multiples doigts de zinc, qui régule des programmes d’expression génique liés à la différenciation neuronale, au guidage axonal et au maintien de l’identité cellulaire. En se liant à l’ADN et en coordonnant des réseaux transcriptionnels, ZFHX4 peut influer sur des processus régulateurs associés à la chromatine et sur des voies de signalisation du développement qui orientent l’engagement de lignée. Des altérations de l’expression de ZFHX4 ont été rapportées dans des études de phénotypes neurodéveloppementaux ainsi que dans le profilage moléculaire de plusieurs contextes tumoraux, ce qui en fait une cible utile pour analyser le contrôle transcriptionnel dans des modèles pertinents pour la maladie. Dans les systèmes murins, Zfhx4 est couramment étudié pour sa contribution au développement neural et pour comprendre comment des programmes pilotés par des facteurs de transcription s’articulent avec les états de prolifération et de différenciation.

Les particules d'activation lentivirales ZFHX4 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Zfhx4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ZFHX4 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Zfhx4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ZFHX4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Zfhx4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.