Plásmido CRISPR de Activación (h) ZDHHC7: sc-405072-ACT

El ZDHHC7 humano codifica una palmitoiltransferasa con dominio DHHC que cataliza la S-palmitoilación de proteínas sustrato, una modificación lipídica reversible que controla su asociación a membranas, el tráfico intracelular, la estabilidad y la salida de señalización. Al moldear el panorama de palmitoilación a través de las endomembranas, ZDHHC7 contribuye a procesos como la localización de receptores y adaptadores, el transporte vesicular y la coordinación de vías de transducción de señales aguas abajo. La palmitoilación desregulada se asocia con una homeostasis proteica alterada y redes de señalización aberrantes implicadas en la transformación oncogénica y en fenotipos relacionados con la inmunidad, lo que convierte a ZDHHC7 en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación próxima a la membrana. El análisis funcional de ZDHHC7 puede ayudar a definir cómo la clasificación dependiente de lipidación y la señalización compartimentalizada influyen en el estado celular y en vías relevantes para la enfermedad.

ZDHHC7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZDHHC7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZDHHC7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZDHHC7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZDHHC7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZDHHC7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZDHHC7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZDHHC7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZDHHC7 en células tumorales con expresión de ZDHHC7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.