Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZDHHC20: sc-406353-ACT

ZDHHC20 code une palmitoyltransférase de la famille DHHC qui catalyse la S‑palmitoylation des résidus cystéine cytosoliques sur des protéines associées aux membranes, influençant leur trafic, leur stabilité et leur capacité de signalisation. En modulant les cycles dynamiques de palmitoylation, ZDHHC20 affecte l’organisation des microdomaines membranaires et les voies en aval liées à la signalisation des récepteurs, au transport vésiculaire et aux réponses au stress cellulaire. Des altérations de l’homéostasie de la palmitoylation ont été associées à une dérégulation de la croissance et de la signalisation immunitaire, et ZDHHC20 a été étudié dans le contexte de la biologie des cancers, de la régulation métabolique et des interactions hôte–pathogène. Ces caractéristiques font de ZDHHC20 un nœud utile pour analyser les mécanismes de lipidation post‑traductionnelle et le remodelage des voies de signalisation dans les cellules humaines.

ZDHHC20 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZDHHC20 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZDHHC20 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZDHHC20 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZDHHC20, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZDHHC20. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZDHHC20 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZDHHC20 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZDHHC20 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZDHHC20 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.