Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZCCHC3 (m): sc-426824

Présentation

Zcchc3 code pour ZCCHC3, une protéine à doigt de zinc de type CCCH impliquée dans la détection cytosolique des acides nucléiques et la régulation de la signalisation immunitaire innée. Les fonctions décrites relient ZCCHC3 aux voies de défense antivirale, notamment via la modulation des réponses associées à RIG-I/MDA5 et à cGAS–STING, qui façonnent les programmes d’expression des gènes de l’interféron de type I et de l’inflammation. En influençant la signalisation déclenchée par l’ARN/ADN et les sorties transcriptionnelles en aval, ZCCHC3 peut affecter les réponses cellulaires à l’infection et au stress immunitaire. La dérégulation de ces processus est pertinente pour l’étude des phénotypes inflammatoires et des interactions hôte–pathogène dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZCCHC3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Zcchc3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Zcchc3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Zcchc3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZCCHC3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Zcchc3 pour l'étude de la signalisation de ZCCHC3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Zcchc3 essentiels à la fonction de ZCCHC3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Zcchc3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZCCHC3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ZCCHC3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Zcchc3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZCCHC3 plasmide HDR (m) et le ZCCHC3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Zcchc3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Zcchc3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.