Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZCCHC11 (h): sc-411714

Présentation

ZCCHC11 (également connu sous le nom de TUT4) code une uridyltransférase à doigt de zinc de type CCHC qui catalyse l’uridylation terminale en 3′ de divers substrats d’ARN, notamment des microARN précurseurs et matures ainsi que certains ARNm. En modifiant les extrémités 3′ des ARN, ZCCHC11 influence la stabilité des ARN et les voies de dégradation, la biogenèse des miARN et la régulation post-transcriptionnelle de l’expression génique, avec une interaction fonctionnelle impliquant le contrôle dépendant de LIN28 des miARN de la famille let-7. Cette activité relie ZCCHC11 à des programmes régulateurs gouvernant la différenciation, la prolifération et le remodelage du transcriptome en réponse au stress. Une expression ou une activité dérégulée de ZCCHC11 a été étudiée dans des contextes de réseaux de miARN aberrants et de signalisation oncogénique, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie du cancer et en métabolisme des ARN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZCCHC11 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZCCHC11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZCCHC11, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZCCHC11 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZCCHC11.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZCCHC11 pour l'étude de la signalisation de ZCCHC11, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZCCHC11 essentiels à la fonction de ZCCHC11
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZCCHC11 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZCCHC11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ZCCHC11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZCCHC11. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZCCHC11 plasmide HDR (h) et le ZCCHC11 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZCCHC11 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZCCHC11 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.