Plasmide CRISPR d'Activation (m) ZC3H4: sc-436020-ACT

La souris Zc3h4 code ZC3H4, une protéine de liaison à l’ARN à doigt de zinc de type CCCH, impliquée dans le métabolisme nucléaire de l’ARN et le contrôle transcriptionnel. Des données récentes relient ZC3H4 à la régulation de la transcription à proximité des promoteurs et au traitement de l’ARN au niveau d’éléments régulateurs, influençant des programmes d’expression génique qui façonnent les transitions d’état cellulaire. Par la coordination de la surveillance de l’ARN et de processus transcriptionnels associés à la chromatine, ZC3H4 intervient dans des voies contrôlant la différenciation, l’expression génique en réponse au stress et la régulation du génome. La dérégulation de ces mécanismes est largement associée à des phénotypes pertinents pour la maladie, notamment une altération du contrôle de la prolifération et une instabilité transcriptionnelle dans des contextes cancéreux et neurodéveloppementaux.

ZC3H4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Zc3h4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZC3H4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Zc3h4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Zc3h4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZC3H4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Zc3h4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZC3H4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZC3H4 dans les cellules tumorales présentant une expression de Zc3h4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.