ZBTB1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411630-ACT

ZBTB1 (zinc finger and BTB domain containing 1) codifica um regulador transcricional que integra interações proteicas mediadas por BTB/POZ com a ligação ao DNA por dedos de zinco C2H2, moldando programas de expressão gênica específicos de linhagem e de contexto. Na biologia de células hematopoéticas e imunes, ZBTB1 está implicado no controle de diferenciação, proliferação e estabilidade genômica, conectando o controle transcricional à resposta a dano no DNA e à manutenção de estados de cromatina. Alterações na atividade de ZBTB1 podem perturbar redes regulatórias que governam o desenvolvimento linfoide e respostas ao estresse, tornando-o relevante para estudos de fenótipos semelhantes à imunodeficiência, desregulação hematológica e circuitos transcricionais oncogênicos. Como fator nuclear, ZBTB1 é frequentemente investigado no mapeamento de vias de repressão/ativação transcricional, organização da cromatina e processos associados a checkpoints.

ZBTB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZBTB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZBTB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZBTB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZBTB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZBTB1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZBTB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZBTB1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZBTB1 em células tumorais com expressão de ZBTB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.