Plásmido CRISPR de Activación (h) ZBP-89: sc-404898-ACT

El ZNF148 humano codifica el factor de transcripción con dedos de zinc tipo Krüppel ZBP-89, una proteína de unión a promotores ricos en GC que modula programas de transcripción dependientes de la ARN polimerasa II que controlan la progresión del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas al estrés celular. ZBP-89 puede actuar como activador o represor según el contexto del promotor y el reclutamiento de cofactores, influyendo en el estado de la cromatina y en el inicio de la transcripción en genes implicados en el control del crecimiento y la apoptosis. A través de sus funciones en la regulación transcripcional, ZBP-89 se integra con vías que gobiernan la homeostasis epitelial y la especificación de linajes, lo que la hace relevante para estudios sobre proliferación desregulada y redes transcripcionales asociadas a tumores. La alteración de la actividad de ZNF148 se ha examinado en el contexto de la biología del cáncer y la señalización inflamatoria, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para la investigación de la regulación génica y la función de promotores.

ZBP-89 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZNF148 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZBP-89 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZNF148 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZNF148, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZBP-89. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZNF148 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZBP-89 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZBP-89 en células tumorales con expresión de ZNF148 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.