ZAR1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406501

Descripción general

ZAR1 (zygote arrest 1) codifica una proteína de unión a ARN, caracterizada principalmente por sus funciones en la embriogénesis temprana, donde favorece la transición de ovocito a cigoto y el control posranscripcional de los ARNm maternos. En células humanas, ZAR1 se ha vinculado con la regulación de la estabilidad y/o traducción del ARNm y con la dinámica de los gránulos citoplasmáticos de ribonucleoproteínas, procesos que influyen en la progresión del ciclo celular y en la competencia del desarrollo. La expresión alterada o la desregulación de factores reguladores de ARN de efecto materno y asociados a la línea germinal se ha relacionado con fenotipos de infertilidad y con fallos del desarrollo en sistemas modelo, lo que hace a ZAR1 relevante para estudios de biología reproductiva y de vías del desarrollo temprano. Como factor enriquecido maternalmente, ZAR1 también constituye un nodo abordable para investigar cómo las redes de regulación del ARN se entrecruzan con las respuestas al estrés y los programas de diferenciación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ZAR1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ZAR1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ZAR1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ZAR1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ZAR1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ZAR1 para la investigación de la señalización de ZAR1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ZAR1 críticos para la función de ZAR1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ZAR1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ZAR1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ZAR1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ZAR1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ZAR1 (h) y el plásmido HDR ZAR1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ZAR1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ZAR1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.