YY1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400395-ACT

YY1 (Yin Yang 1) ist ein ubiquitär exprimierter Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der sowohl als Aktivator als auch als Repressor fungiert, um kontextabhängige Genexpressionsprogramme zu koordinieren. Er reguliert die Chromatinarchitektur und die Transkription durch RNA-Polymerase II, indem er Polycomb-Gruppen-Komplexe, Histonmodifikatoren und Core-Promotor-Elemente einbindet, und beeinflusst dabei Prozesse wie Zellzyklusprogression, DNA-Schadensantworten, Differenzierung und metabolische Anpassung. YY1 ist an Enhancer‑Promotor‑Schleifenbildung beteiligt und steuert linien-/zelltypspezifische transkriptionelle Netzwerke, wodurch er mit Signalwegen wie epigenetischer Regulation, Wnt/β‑Catenin-Signalgebung und stressresponsiver Transkription verknüpft ist. Eine fehlregulierte YY1-Aktivität und veränderte Bindungslandschaften wurden mit onkogenen transkriptionellen Zuständen, Veränderungen der Immun- und Entzündungssignalgebung sowie neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Zusammenhang gebracht, was YY1 zu einem häufig genutzten Knotenpunkt für mechanistische Studien der Transkriptionskontrolle macht.

YY1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen YY1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

YY1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des YY1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der YY1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen YY1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native YY1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von YY1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des YY1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem YY1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.