YME1L1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409793

Descripción general

YME1L1 codifica una metaloproteasa i-AAA dependiente de ATP localizada en la mitocondria e incrustada en la membrana interna, donde impulsa el control de calidad de las proteínas de membrana y ayuda a mantener la integridad de la cadena respiratoria. Al acoplar la hidrólisis de ATP a la proteólisis, YME1L1 regula la proteostasis mitocondrial, la morfología del orgánulo y la adaptación al estrés, incluido el recambio de componentes mal plegados o dañados dentro del dominio orientado hacia el espacio intermembrana. Contribuye a la dinámica mitocondrial mediante el procesamiento de factores que influyen en la arquitectura de las crestas y en el equilibrio fisión–fusión, vinculando su actividad a la homeostasis bioenergética y al manejo de especies reactivas de oxígeno. La alteración de la función de YME1L1 se ha asociado, en estudios genéticos, con fenotipos de disfunción mitocondrial y con mecanismos de enfermedades del neurodesarrollo o neuromusculares, lo que la hace relevante para modelar defectos en el control de calidad mitocondrial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO YME1L1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen YME1L1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del YME1L1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de YME1L1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína YME1L1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en YME1L1 para la investigación de la señalización de YME1L1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de YME1L1 críticos para la función de YME1L1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de YME1L1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido YME1L1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido YME1L1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus YME1L1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR YME1L1 (h) y el plásmido HDR YME1L1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología YME1L1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana YME1L1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.