Plásmido CRISPR de Activación (h2) YDJC: sc-414675-ACT-2

El gen humano YDJC codifica una proteína conservada de la familia putativa de desacetilasas/epimerasas, implicada en el procesamiento de metabolitos celulares y en el mantenimiento de la proteostasis, con evidencia que respalda funciones en el equilibrio redox y en respuestas adaptativas al estrés. YDJC se ha relacionado con la modulación del control de calidad proteica y de vías homeostáticas asociadas a la mitocondria, lo que la hace relevante para estudios sobre estrés oxidativo, señalización asociada a la inflamación y remodelación metabólica. Se han descrito alteraciones en la expresión de YDJC en múltiples contextos patológicos, incluidos el cáncer y firmas moleculares asociadas a la neurodegeneración, lo que sugiere su utilidad como nodo mecanístico para investigar la resiliencia celular desregulada. La edición génica de YDJC permite interrogar funcionalmente su contribución a redes metabólicas y de respuesta al estrés, respaldando experimentos de cartografía de vías, análisis genotipo–fenotipo y generación de modelos para estudios a nivel de sistemas sobre la regulación del estado celular.

YDJC El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de YDJC sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

YDJC El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus YDJC en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional YDJC, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de YDJC. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo YDJC y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de YDJC en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía YDJC en células tumorales con expresión de YDJC silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.