YB-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401385-NIC

YBX1 codifica la Y-box binding protein 1 (YB-1), un fattore multifunzionale di legame a DNA/RNA che coordina la regolazione trascrizionale, lo splicing dell’mRNA, la stabilità e la traduzione. YB-1 partecipa alle risposte cellulari allo stress e alle reti di trasduzione del segnale, incluse vie collegate all’attività di MAPK/ERK e PI3K/AKT, e modula l’espressione di geni coinvolti in proliferazione, sopravvivenza e plasticità epitelio-mesenchimale. Attraverso i suoi ruoli nel controllo trascrizionale associato alla cromatina e nei complessi ribonucleoproteici, YB-1 influenza la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e i programmi adattativi di risposta allo stress. Un’espressione deregolata di YBX1 o la fosforilazione di YB-1 è stata associata alla biologia tumorale, a fenotipi di resistenza ai farmaci e alla segnalazione infiammatoria, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici nella ricerca sul cancro e sullo stress cellulare.

YB-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus YBX1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di YBX1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di YBX1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con YBX1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.