Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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YAP Double Nickase Plasmid (h): sc-400040-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das YAP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- YAP Double-Nickase-Plasmid (h) und YAP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf YAP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: YAP: sc-376830
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
YAP Double Nickase Plasmid (h) | sc-400040-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
YAP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400040-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
YAP1 kodiert den transkriptionellen Koaktivator YAP, einen zentralen Effektor des Hippo-Signalwegs, der Zelldichte, mechanische Reize und Zellpolarität integriert, um Proliferation, Apoptose und Organgröße zu steuern. Sind die Hippo-Kinasen inaktiv, akkumuliert YAP im Zellkern und kooperiert mit Transkriptionsfaktoren der TEAD-Familie, um Genprogramme zu regulieren, die mit Wachstum, Zytoskelett-Umbau und Signalgebung der extrazellulären Matrix verknüpft sind. Eine fehlregulierte YAP-Aktivität wird mit veränderter Kontaktinhibition, epithelial-mesenchymalen Dynamiken und stammzellähnlichen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig in der Krebsbiologie, bei Fibrose sowie in regenerativen Prozessen untersucht. YAP steht außerdem in Wechselwirkung mit GPCR-, Wnt/β-Catenin- und TGF-β-Signalwegen, wodurch YAP1 einen nützlichen Knotenpunkt für die Kartierung von Signalweg-Crosstalk und die Umverdrahtung transkriptioneller Netzwerke darstellt.
YAP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des YAP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von YAP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die YAP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit YAP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.