XRN1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401910-NIC

XRN1 kodiert eine konservierte 5′→3′-Exoribonuklease, die den zytoplasmatischen mRNA-Abbau antreibt, indem sie nach der Decapping-Reaktion nicht mehr „gecappte“ RNA abbaut. Dadurch prägt sie den Umsatz von Transkripten sowie die RNA-Qualitätskontrolle. XRN1 wirkt an der Schnittstelle von Decapping-Komplexen, P-Bodies und kotranslationalen Überwachungspfaden wie dem nonsense-mediated decay (NMD) und trägt so zur Koordination von Genexpressionsprogrammen während Stressantworten bei. Durch die Regulation der Stabilität spezifischer Transkripte beeinflusst XRN1 die Signalgebung der angeborenen Immunantwort und umfassendere Netzwerke des RNA-Stoffwechsels, die in Krebs- und neuroentwicklungsbezogenen Kontexten häufig gestört sind. Eine dysregulierte XRN1-Aktivität wurde zudem mit veränderten antiviralen Antworten und einer veränderten Empfindlichkeit gegenüber der Replikation von RNA-Viren in Verbindung gebracht, was XRN1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Wirt–Pathogen-Interaktionen macht.

XRN1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des XRN1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von XRN1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die XRN1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit XRN1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.