XRCC3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405570-ACT

XRCC3 codifica un paralogo di RAD51 che svolge un ruolo nella riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA mediata dalla ricombinazione omologa e nel mantenimento della stabilità della forcella di replicazione. XRCC3 contribuisce alla formazione e alla regolazione dei filamenti nucleoproteici di RAD51, favorendo una riparazione accurata durante le fasi S/G2 e limitando le aberrazioni cromosomiche. Attraverso il suo ruolo nella sorveglianza del genoma, XRCC3 influenza le risposte cellulari allo stress replicativo e agli agenti che danneggiano il DNA, collegandosi a vie che preservano l’integrità cromosomica. Un’alterata attività o espressione di XRCC3 è stata associata a un aumento dell’instabilità genomica ed è stata studiata nel contesto della suscettibilità al cancro e della biologia tumorale.

XRCC3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di XRCC3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

XRCC3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus XRCC3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione XRCC3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di XRCC3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus XRCC3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da XRCC3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via XRCC3 nelle cellule tumorali con espressione di XRCC3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.