Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) XPG: sc-416940-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) XPG correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide XPG Double Nickase (h) et le plasmide XPG Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ERCC5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: XPG Antibody (8H7): sc-13563
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) XPG | sc-416940-NIC | 20 µg | $410.00 |
ERCC5 code pour l’endonucléase XPG, une nucléase spécifique de la structure, essentielle à la réparation par excision de nucléotides (NER), qui incise l’ADN endommagé du côté 3′ des bulles contenant la lésion. XPG agit au sein du complexe de réparation centré sur TFIIH et contribue à la stabilité du génome en éliminant les photoproduits induits par les UV et les adduits volumineux, limitant ainsi le stress réplicatif et l’accumulation de mutations. En plus de la NER canonique, XPG a été associée à la réparation couplée à la transcription et au traitement des R-loops et d’autres structures secondaires de l’ADN, en interaction avec la signalisation ATR/CHK1. Les dysfonctionnements pathogènes d’ERCC5 sont liés à des troubles caractérisés par des réponses aux dommages de l’ADN altérées et un déclin cellulaire accéléré, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude des relations génotype–phénotype en biologie de la réparation de l’ADN.
XPG Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ERCC5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ERCC5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ERCC5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ERCC5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.