Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) XPF: sc-401692-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) XPF correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide XPF Double Nickase (h) et le plasmide XPF Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ERCC4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: XPF Antibody (F-11): sc-398032
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) XPF | sc-401692-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) XPF | sc-401692-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERCC4 code pour l’endonucléase XPF, spécifique des structures, qui forme un hétérodimère avec ERCC1 afin de catalyser des incisions 5′ au niveau des lésions de l’ADN et des intermédiaires d’ADN ramifiés. Ce complexe est indispensable à la réparation par excision de nucléotides (NER) des adduits volumineux, participe à la réparation des pontages interbrins dans le cadre du réseau de l’anémie de Fanconi, et contribue au traitement des fourches de réplication bloquées. L’activité de XPF aide à maintenir la stabilité du génome en coordonnant la reconnaissance des lésions, l’incision et les étapes en aval de synthèse lors de la réparation. Des défauts de fonction d’ERCC4 sont liés à une altération des réponses aux dommages de l’ADN et sont associés à une sensibilité aux UV ainsi qu’à des phénotypes d’instabilité génomique pertinents pour la biologie du cancer et les maladies héréditaires de la réparation de l’ADN.
XPF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ERCC4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ERCC4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ERCC4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ERCC4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.