Plásmido Doble Nickase (h) XBP1: sc-400131-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)XBP1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa XBP1 (h) y el plásmido de doble nickasa XBP1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a XBP1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: XBP1 Anticuerpo (F-4): sc-8015
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) XBP1 | sc-400131-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) XBP1 | sc-400131-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
XBP1 (proteína de unión a X-box 1) es un factor de transcripción de tipo “cremallera de leucina básica” (bZIP) que actúa como efector central de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), en particular aguas abajo de la señalización de estrés del retículo endoplásmico (RE) a través del empalme no convencional mediado por IRE1. La isoforma empalmada de XBP1 impulsa programas transcripcionales que aumentan la capacidad del RE, promueven el plegamiento y la secreción de proteínas, y coordinan la proteostasis con el metabolismo lipídico y la diferenciación celular. La actividad de XBP1 está estrechamente vinculada a la función de las células secretoras en linajes inmunitarios y endocrinos, e influye en la señalización inflamatoria y en la adaptación metabólica bajo estrés. La desregulación de las vías dependientes de XBP1 se ha asociado con afecciones que implican estrés crónico del RE, incluyendo la biología del cáncer, mecanismos de enfermedades metabólicas y trastornos inmunomediados, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudiar los circuitos de adaptación al estrés.
XBP1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus XBP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de XBP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de XBP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con XBP1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.