Plasmide CRISPR/Cas9 KO Xanthine Oxidase (h): sc-401185

Présentation

Le gène humain **XDH** code la **xanthine oxydase**, une enzyme dépendante du molybdène qui catalyse les étapes terminales du catabolisme des purines en convertissant l’hypoxanthine en xanthine, puis la xanthine en acide urique. Au cours de ces réactions, elle peut générer des espèces réactives de l’oxygène (ROS), reliant ainsi le métabolisme des purines à l’homéostasie redox et aux voies de signalisation du stress oxydant. L’activité de la xanthine oxydase influence la fonction endothéliale, les réponses inflammatoires et l’adaptation métabolique, et sa dérégulation a été associée à des processus liés à l’hyperuricémie, aux mécanismes de lésion d’ischémie–reperfusion et à des voies oxydatives pertinentes pour les maladies cardiométaboliques. XDH est également étudié dans le contexte du métabolisme hépatique et de l’équilibre azoté systémique, où des modifications du renouvellement des purines peuvent remodeler les réponses cellulaires au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Xanthine Oxidase (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène XDH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du XDH, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert XDH à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Xanthine Oxidase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en XDH pour l'étude de la signalisation de Xanthine Oxidase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de XDH essentiels à la fonction de Xanthine Oxidase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de XDH pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Xanthine Oxidase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Xanthine Oxidase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus XDH. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Xanthine Oxidase plasmide HDR (h) et le Xanthine Oxidase (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie XDH pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles XDH définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.