Plásmido Doble Nickase (h) WSB1: sc-411879-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)WSB1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa WSB1 (h) y el plásmido de doble nickasa WSB1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a WSB1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: WSB1 Anticuerpo (A-10): sc-393483
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) WSB1 | sc-411879-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) WSB1 | sc-411879-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WSB1 (WD repeat and SOCS box containing 1) codifica un componente de reconocimiento de sustratos de los complejos de ligasa E3 de ubiquitina tipo Cullin-RING, conectando dianas proteicas específicas con la ubiquitinación y su recambio mediante el proteasoma. A través de su dominio de repeticiones WD y su caja SOCS, WSB1 ayuda a coordinar el control de calidad proteico y la remodelación del proteoma celular dependiente de señales, con efectos posteriores sobre las respuestas al estrés, la señalización por factores de crecimiento y los programas transcripcionales. La alteración de la actividad de WSB1 se ha investigado en contextos en los que la regulación mediada por ubiquitina contribuye a fenotipos asociados a enfermedad, incluyendo la biología tumoral y la adaptación celular desregulada a la hipoxia y al estrés. Como nodo en los circuitos de la vía de la ubiquitina, WSB1 se estudia con frecuencia por su impacto en la dinámica de las vías y en la regulación dependiente de la proteostasis.
WSB1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus WSB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de WSB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de WSB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con WSB1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.