WSB1 Plasmide Double Nickase (h): sc-411879-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- WSB1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il WSB1 Double Nickase Plasmid (h) e il WSB1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira WSB1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: WSB1 Antibody (A-10): sc-393483
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
WSB1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-411879-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
WSB1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-411879-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WSB1 (WD repeat and SOCS box containing 1) codifica una componente di riconoscimento del substrato dei complessi di ubiquitina ligasi E3 di tipo Cullin-RING, collegando specifici bersagli proteici all’ubiquitinazione e alla degradazione proteasomiale. Attraverso il suo dominio a ripetizioni WD e la SOCS box, WSB1 contribuisce a coordinare il controllo di qualità delle proteine e il rimodellamento, dipendente dai segnali, dei proteomi cellulari, con effetti a valle sulle risposte allo stress, sulla segnalazione dei fattori di crescita e sui programmi trascrizionali. Un’alterazione dell’attività di WSB1 è stata studiata in contesti in cui la regolazione mediata dall’ubiquitina contribuisce a fenotipi associati a malattie, inclusi la biologia tumorale e la disfunzione dell’adattamento cellulare all’ipossia e allo stress. In quanto nodo nei circuiti della via dell’ubiquitina, WSB1 è spesso oggetto di studio per il suo impatto sulla dinamica delle vie di segnalazione e sulla regolazione dipendente dalla proteostasi.
WSB1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus WSB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di WSB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di WSB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con WSB1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.