Plásmido CRISPR de Activación (h) Wnt-8b: sc-405077-ACT

WNT8B codifica la glicoproteína secretada Wnt-8b, un ligando de la red de señalización Wnt que regula la especificación del destino celular, la proliferación y el patrón de los tejidos. Wnt-8b influye principalmente en los programas transcripcionales canónicos de Wnt/β-catenina al interactuar con los correceptores Frizzled y LRP, con efectos aguas abajo sobre la expresión génica del desarrollo y las trayectorias de diferenciación. En la biología humana, la actividad de WNT8B está estrechamente vinculada a procesos del neurodesarrollo y a la regionalización del sistema nervioso central, y las alteraciones en el “tono” de la vía Wnt se estudian con frecuencia en el contexto de la señalización oncogénica y el control anómalo del crecimiento. Por ello, modular la expresión de WNT8B es relevante para analizar el crosstalk entre vías que incluye la transcripción mediada por TCF/LEF, estados celulares tipo célula madre y resultados de diferenciación dependientes del contexto.

Wnt-8b El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de WNT8B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Wnt-8b El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus WNT8B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional WNT8B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Wnt-8b. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo WNT8B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Wnt-8b en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Wnt-8b en células tumorales con expresión de WNT8B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.