Plasmide CRISPR d'Activation (h) Wnt-8b: sc-405077-ACT

WNT8B code pour la glycoprotéine sécrétée Wnt-8b, un ligand du réseau de signalisation Wnt qui régule la spécification du destin cellulaire, la prolifération et la mise en place des tissus. Wnt-8b influence principalement les programmes transcriptionnels canoniques Wnt/β-caténine en interagissant avec les co-récepteurs Frizzled et LRP, avec des effets en aval sur l’expression des gènes du développement et les trajectoires de différenciation. En biologie humaine, l’activité de WNT8B est étroitement liée aux processus de neurodéveloppement et à la régionalisation du système nerveux central, et les altérations du niveau d’activité de la voie Wnt sont fréquemment étudiées dans le contexte de la signalisation oncogénique et d’un contrôle anormal de la croissance. Moduler l’expression de WNT8B est donc pertinent pour disséquer les interactions entre voies, notamment la transcription médiée par TCF/LEF, les états cellulaires de type « stem », et des issues de différenciation dépendantes du contexte.

Wnt-8b Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WNT8B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Wnt-8b Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WNT8B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WNT8B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Wnt-8b. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WNT8B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Wnt-8b au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Wnt-8b dans les cellules tumorales présentant une expression de WNT8B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.