Wnt-7b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423722

Übersicht

Wnt7b kodiert das sezernierte Glykoprotein Wnt-7b, einen Liganden, der kanonische und nicht-kanonische Wnt-Signalwege aktiviert, um während der Embryogenese und der postnatalen Homöostase in der Maus Zellschicksalsentscheidungen, Proliferation, Polarität und Gewebemusterbildung zu regulieren. Die Bindung von Wnt-7b an Frizzled/LRP-Rezeptoren beeinflusst sowohl die β‑Catenin-abhängige Transkription als auch Signalwege der planaren Zellpolarität und Ca²⁺-gekoppelte Pfade und formt dadurch epithel-mesenchymale Interaktionen und die Organmorphogenese. Eine fehlregulierte Wnt7b-Aktivität wurde mit aberranten Entwicklungsprogrammen und Umbauprozessen in Verbindung gebracht, die sich in verschiedenen Gewebekontexten mit onkogener Signalgebung, Fibrose und entzündlichen Mikroumgebungen überschneiden. Als Knotenpunkt des Signalwegs wird Wnt-7b häufig hinsichtlich seiner Rollen für das Verhalten von Stamm-/Vorläuferzellen, die Gefäß- und Atemwegsbiologie sowie die Wechselwirkung mit TGF‑β-, Hedgehog- und Notch-Signalgebung untersucht.

Das Wnt-7b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Wnt7b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Wnt7b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Wnt7b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Wnt-7b-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Wnt7b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Wnt-7b-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Wnt7b-Exone abzielen, die für die Wnt-7b-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Wnt7b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Wnt-7b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Wnt-7b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Wnt7b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Wnt-7b HDR-Plasmid (m) und Wnt-7b HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Wnt7b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Wnt7b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.