Plasmide CRISPR d'Activation (h2) Wnt-5b: sc-402157-ACT-2

Le gène humain WNT5B code le ligand sécrété Wnt-5b, un médiateur clé de la signalisation Wnt indépendante de la β-caténine (non canonique) qui régule la polarité cellulaire, la migration directionnelle et le remodelage du cytosquelette via des voies telles que la polarité planaire (PCP) et la signalisation Wnt/Ca²⁺. Wnt-5b se lie aux récepteurs Frizzled et à des co-récepteurs (notamment des protéines de la famille ROR) afin de moduler des effecteurs en aval qui façonnent la morphogenèse tissulaire, la différenciation mésenchymateuse et les interactions avec les voies de signalisation inflammatoires. Une expression ou une signalisation de WNT5B altérée a été associée à une dérégulation des programmes de développement et fait l’objet de nombreuses études dans des contextes tels que l’invasivité des cellules tumorales, la régulation métabolique et adipogénique, et le remodelage fibrotique. L’édition génomique de WNT5B permet des études mécanistiques sur l’architecture spécifique au ligand des réseaux Wnt, l’utilisation des récepteurs, ainsi que les conséquences transcriptionnelles et phénotypiques dans des modèles cellulaires modifiés et des systèmes d’organoïdes.

Wnt-5b Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WNT5B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Wnt-5b Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WNT5B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WNT5B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Wnt-5b. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WNT5B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Wnt-5b au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Wnt-5b dans les cellules tumorales présentant une expression de WNT5B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.