Plásmido Doble Nickase (h) WNK1: sc-403420-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)WNK1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa WNK1 (h) y el plásmido de doble nickasa WNK1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a WNK1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) WNK1 | sc-403420-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) WNK1 | sc-403420-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WNK1 (with-no-lysine [K] 1) codifica una quinasa de serina/treonina que actúa como regulador aguas arriba del transporte de iones y de la homeostasis del volumen celular mediante cascadas de fosforilación que involucran a SPAK/OSR1 y, aguas abajo, a cotransportadores de la familia SLC12. Al integrar señales de estrés osmótico con salidas de señalización, WNK1 influye en el manejo epitelial de electrolitos, la dinámica del citoesqueleto y la comunicación cruzada entre redes de quinasas que afecta a la proliferación y la migración. La actividad de WNK1 está vinculada a la regulación de la presión arterial y al manejo renal de sal, y la desregulación de vías dependientes de WNK1 se ha estudiado en contextos que incluyen fenotipos asociados a la hipertensión y neuropatías. Estas características hacen de WNK1 un nodo útil para diseccionar la señalización sensible a la osmolalidad y la regulación de vías de transporte en modelos de células humanas.
WNK1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus WNK1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de WNK1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de WNK1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con WNK1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.