Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
WIPI-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405215
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- WIPI-1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico WIPI-1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: WIPI-1 Anticuerpo (F-6): sc-376205
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
WIPI-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405215 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
WIPI1 codifica WIPI-1, una proteína de repeticiones WD que se une al fosfatidilinositol 3-fosfato y actúa como efector clave del complejo PI3K de clase III durante la biogénesis del autofagosoma. WIPI-1 participa en eventos tempranos de la autofagia al reclutar la maquinaria ATG aguas abajo hacia fagóforos nacientes y al favorecer la remodelación de membranas necesaria para la maduración del autofagosoma. A través de su papel en la autofagia y la adaptación al estrés celular, WIPI-1 es relevante para vías que regulan la proteostasis, el control de calidad de orgánulos y la señalización de nutrientes. La desregulación de componentes de la autofagia, incluidas las proteínas de la familia WIPI, se ha asociado en modelos experimentales con una supervivencia alterada de células tumorales, procesos neurodegenerativos y señalización inflamatoria.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO WIPI-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen WIPI1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del WIPI1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de WIPI1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína WIPI-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en WIPI1 para la investigación de la señalización de WIPI-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de WIPI1 críticos para la función de WIPI-1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de WIPI1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido WIPI-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido WIPI-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus WIPI1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR WIPI-1 (h) y el plásmido HDR WIPI-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología WIPI1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana WIPI1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.