Wee 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423702

Übersicht

Maus-Wee1 kodiert die Proteinkinase WEE1, einen zentralen Regulator des G2/M-Checkpoints, der die CDK1-Aktivität durch inhibitorische Phosphorylierung dämpft und so einen vorzeitigen Eintritt in die Mitose verhindert. Durch die Integration von Signalen aus ATR/CHK1-vermittelten DNA-Schadens- und Replikationsstress-Signalwegen trägt WEE1 dazu bei, die Genomintegrität mit dem Fortschreiten des Zellzyklus zu koordinieren. Eine Störung von Wee1 kann die Checkpoint-Kontrolle, die Toleranz gegenüber Replikationsstress und die mitotische Genauigkeit beeinflussen – Prozesse, die häufig mit der Tumorbiologie und anderen proliferativen Erkrankungen in Verbindung stehen. Wee1 wird daher breit in Studien zu Mechanismen der Zellzyklusregulation, zu DNA-Schadensantworten und zu synthetisch letalen Interaktionen mit anderen Checkpoint- und Reparaturfaktoren untersucht.

Das Wee 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Wee1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Wee1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Wee1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Wee 1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Wee1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Wee 1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Wee1-Exone abzielen, die für die Wee 1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Wee1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Wee 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Wee 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Wee1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Wee 1 HDR-Plasmid (m) und Wee 1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Wee1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Wee1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.