Plásmido CRISPR de Activación (h) WDR62: sc-410410-ACT

WDR62 codifica una proteína andamiaje con repeticiones WD que se localiza en los centrosomas y en los polos del huso, coordinando la organización de los microtúbulos y la progresión mitótica. Se la implica de forma amplia en la regulación del ciclo celular, la proliferación de progenitores neurales y la señalización activada por estrés, con interacciones descritas en redes de quinasas mitóticas y vías asociadas a JNK. En biología humana, WDR62 se ha vinculado a fenotipos del neurodesarrollo y a una diferenciación neuronal alterada, en consonancia con funciones en la división simétrica/asimétrica y el desarrollo cortical. Su conectividad en rutas la convierte en una diana útil para desentrañar mecanismos de estabilidad genómica, función del centrosoma y control proliferativo en modelos celulares relevantes para enfermedad.

WDR62 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de WDR62 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

WDR62 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus WDR62 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional WDR62, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de WDR62. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo WDR62 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de WDR62 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía WDR62 en células tumorales con expresión de WDR62 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.